МЕТОДЫ КОНТРАСТА
Светлое поле На светлом поле выделяется более темный объект. Этот метод применяется для исследования прозрачных препаратов в проходящем свете, в отраженном свете – для наблюдения непрозрачных объектов. В обоих случаях изображение создается за счет того, что разные участки препарата неодинаково отклоняют падающий на них свет, а отраженные лучи имеют различную интенсивность.
Темное поле На темном поле выделяется светлый объект. Темнопольная микроскопия основана на способности микроорганизмов сильно рассеивать свет. Для темнопольной микроскопии пользуются обычными объективами и специальными темнопольными конденсорами. У конденсоров темного поля затемнена центральная часть, поэтому объект освещается только косыми боковыми лучами…
Светлое поле
На светлом поле выделяется более темный объект. Этот метод применяется для исследования прозрачных препаратов в проходящем свете, в отраженном свете – для наблюдения непрозрачных объектов. В обоих случаях изображение создается за счет того, что разные участки препарата неодинаково отклоняют падающий на них свет, а отраженные лучи имеют различную интенсивность.
Темное поле
На темном поле выделяется светлый объект. Темнопольная микроскопия основана на способности микроорганизмов сильно рассеивать свет. Для темнопольной микроскопии пользуются обычными объективами и специальными темнопольными конденсорами. У конденсоров темного поля затемнена центральная часть, поэтому объект освещается только косыми боковыми лучами.
Поляризация
Поляризованный свет нередко позволяет выявлять структуру объектов, лежащую за пределами обычного оптического разрешения. При наблюдении анизотропных объектов (это минералы, угли, некоторые животные и растительные ткани и клетки, искусственные и естественные волокна) используются их поляризационные свойства. В микроскоп помещается поляризатор (перед осветительной системой) и анализатор (после объектива). Поляризатор пропускает к предмету только поляризационный свет с определенными свойствами. В случае, когда сам предмет создает поляризацию, он может изменять плоскость поляризации падающего света, так что видимый образ может порождаться анализатором. При скрещенных поляризаторе и анализаторе в темном поле зрения микроскопа видны темные, светлые или окрашенные анизотропные элементы объекта. Вид этих элементов зависит от положения объекта относительно плоскости поляризации и от величины двойного лучепреломления.
Фазовый контраст
На светло-сером фоне наблюдается темно-серый рельефный объект с ярко выраженным контуром. Применяется для исследования неокрашенных прозрачных объектов, в частности, живых клеток. Фазово-контрастное устройство может быть установлено на любом световом микроскопе и состоит из набора объективов со специальными фазовым пластинками, конденсора с поворачивающимся диском. В нем установлены кольцевые диафрагмы, соответствующие фазовым пластинкам в каждом из объективов и вспомогательного микроскопа для настройки фазового контраста.
Флюорисценция
На темном фоне выделяются светящиеся объекты или части объекта. Метод основан на способности некоторых объектов излучать свет при ультрафиолетовом освещении. Во флюоресцентной микроскопии падающее освещение исключается, и можно наблюдать лишь вторично излучаемый свет разной длины волны, использующий фосфоресценцию или флюоресценцию. Микроскопы такого типа применяются в биологии, а также в медицине – для диагностики (особенно рака).
Дифференциально-интерференционный контраст
Интерференционный микроскоп – это дальнейшее развитие фазово-контрастного микроскопа. В интерференционном контрастном микроскопе пучок света разделен таким образом, что которой контрольный пучок отклоняется на небольшое расстояние, обычно меньшее, чем диаметр дифракционного кружка. При таком методе получаются окрашенные изображения, дающие очень ценную информацию при исследовании живого материала.
ДИК (дифференциально-интерференционный контраст) – является прекрасным механизмом для создания контраста в прозрачных препаратах. Микроскопия с ДИК представляет собой интерференционную систему с расщеплением пучка света, при которой контрольный пучок отклоняется на небольшое расстояние, обычно меньшее, чем диаметр дифракционного кружка.
С помощью данного метода получается монохроматическое оттененное изображение, которое отображает градиент оптических путей как высоко-, так и низкопространственных частот, присутствующих в препарате.
Те участки препарата, при прохождении через которые оптические пути удлиняются по отношению к контрольному пучку, выглядят ярче или темнее, тогда как участки, между которыми различия меньше, обладают противоположным контрастом. Чем круче становится градиент оптических пучков, тем резче контраст изображения.